如果尚未扣除粗看应该线性范围是325-500 之间，你可以用EXCEL自己确认。不过好像下限值浓度偏大啊，30多ug/ml. 15ug/ml及以下都一直在波动，显示未达到检测限。
首先要看你用的是什么函数做的曲线；硬件要使用好的，进口的板、进口的枪和枪头等等，还要有相当熟练的点板能力；使用稳定的标稀、酶稀、显色液；标准品按照一定的比例稀释，一般选3倍、5倍、4倍等，实在不行的再用混合比例；。。影响线性的原因很多的，建议多看论文。
一般来说，如果你是夹心法的话主要要用棋盘法确定一抗和抗原的浓度，二抗一般不需要怎么摸条件，你选一到两个说明书上推荐的浓度即可。棋盘法中选OD值在1左右的一抗浓度，（此时，应该有多个1对应的浓度）你要选一个在这个浓度下，测抗原的线性拉得最宽的那一个。
柱状图：柱状图主要用于显示多个样本的测定结果，每个样本的结果通常由一个垂直柱表示，柱的高度表示样本中测得的特定分子或抗原的浓度。这种图表对于检测大量样品时非常有用。 线性图：线性图通常用于显示单个样品的Elisa结果。这些图表可以清楚地展示时间或者其他变量与分子或抗原浓度之间的关系。
单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式；在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。得到公式和R平方值。也可以用上面说的方法：双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。
ELISA酶联免疫吸附实验 原理：免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理，对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法，酶联免疫吸附分析（下称ELISA）是免疫分析的一种，分三个部分组成：免疫识别，信号输出和数据处理。
首先收集ELISA实验的所有数据，对每个孔的吸光度值进行背景校正。然后根据标准曲线，将修正后的吸光度值转化为样品的浓度。最后将数据转化为柱状图、折线图等形式即可。
针对于HBeAb的中和抑制法 采用抗-HBe抗体包被反应板，加入校准品及被测样本，同时加入定量HBeAg中和抗原，经过振荡孵育，洗板后再加入铕标记的抗-HBe，若标本中抗-HBe浓度高，HBeAg将被大量中和，使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。
如检测抗原，可采用抗原捕获（双抗体夹心）ELISA。除此之外，ELISA还有很多其他的演变方法，如竞争抑制法等。
ELISA的多样性与示例/： 从四种核心形式出发，每一种都有独特的设计原理。直接法虽快速但灵敏度有限；间接法通过信号放大减少背景噪音，但过程可能涉及交叉反应；夹心法优化了特异性和敏感性，但选择合适的抗体至关重要；竞争法则在对抗原浓度未知的样本中展现出优势，通过抑制信号来评估样本中的目标。
生物素化抗体工作液：按当次试验所需要得用量，使用前20分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体（1：30）成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致生物素化 抗体量不足，可向我们公司单独购买生物素化抗体。
其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。捕获包被法测抗体IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。
在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。两类反应的结果判断方法不同，分述于下。 （1）间接法和夹心法 这类反应的定性结果可以用肉眼判断。目视标本也无色或近于无色者判为阴性，显色清晰者为阳性。
间接竞争ELISA 间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原。加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结。
以下只针对药物等半抗原检测的ELISA法：首先，竞争法的理论基础是有限抗体。这也是药物检测中一般使用包被抗原法ELISA的原因。只有抗体的量有限，固相化的抗原才能与待测抗原竞争抗体。
即：用于检测抗体的间接法（图a）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图b）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
与小血管炎相关的自身抗体（ANCA）检测最常用ELISA法。抗角蛋白抗体（AKA）的检测常采用间接免疫荧光分析法，对于早期诊断类风湿关节炎具有重要的临床意义。抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）的检测最常用ELISA，是诊断类风湿关节炎的一个高度特异性的新指标。此外，我还学会了糖化血红蛋白和尿微量白蛋白的检测 。
1、其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。
2、针对于HBeAb的中和抑制法 采用抗-HBe抗体包被反应板，加入校准品及被测样本，同时加入定量HBeAg中和抗原，经过振荡孵育，洗板后再加入铕标记的抗-HBe，若标本中抗-HBe浓度高，HBeAg将被大量中和，使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。
3、间接竞争ELISA是ELISA中的一种，在检测过程中，在预先包被有链霉素一蛋白质偶联物的酶标板微孔内，同时加入抗链霉素抗体和标准链霉素溶液，微孔内与蛋白质偶联的链霉素与添加的链霉素标准品或样品提取液中的链霉素竞争抗链霉素抗体的结合位点。游离链霉素量越多，抗体与固定链霉素结合越少，反之结合越多。
4、- 间接竞争ELISA因其特有的结合机会不平等，表现出较高的灵敏度。在间接法中，固相抗原与抗体的接触面积较小，结合机会不平等，导致固相抗原的相对结合率接近0%。因此，其抑制曲线的斜率大于直接竞争法，灵敏度也更高。
5、反映抗体活性和方便结果解读。反映抗体活性：抑制率可以作为一种有效的指标来评估抗体活性，在竞争ELISA中，会引入一个抗原或特定的分子，与被测样品中的抗体竞争结合。方便结果解读：抑制率作为百分比的形式，直观上易于理解和比较，高的抑制率表示抗体的活性低，低的抑制率则表示抗体的活性高。
直接法（directELISA）将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。
- 间接竞争ELISA通常可以使用酶标二抗，因为二抗可以针对抗体的多个部位，存在放大效应，从而提高灵敏度。- 直接竞争ELISA难以实现放大效应，常用的有生物素化抗原与酶标亲和素，但在模式上似乎不存在放大效应。
标记差异 直接竞争ELISA使用标记抗原，与样品中的抗原竞争结合抗体。间接竞争ELISA则使用标记抗体，固相抗原与样品中的抗原竞争结合标记抗体。 实验模型 间接竞争ELISA的模型为：将抗原包被在微孔板上，然后将HRP标记的抗体与样品同时加入。
间接竞争ELISA 间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原。加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结。
ELISA，即酶联免疫吸附实验，是生物医学研究和临床诊断领域不可或缺的技术。它的核心原理是利用抗体与特定抗原的特异性结合，来测定和测量目标生物分子，如蛋白质和抗体的含量。这个实验方法包括多种变体，如直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA，每种都有其特定的应用场景和检测目标。
